基于 FRET 成像探究棕榈酰化修饰调节 Fyn 激酶活性
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江苏省科技厅自然科学基金项目(BK20181464),国家自然科学基金项目(11872129,11532003)


Palmitoylation in Regulating Fyn Kinase Activity Based on FRET Imaging
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    摘要:

    目的 探讨棕榈酰化修饰调节非受体酪氨酸激酶 Fyn 活性的分子机制。 方法 利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时检测细胞中的 Fyn 活性,并结合棕榈酰化位点缺失和共转染蛋白质酪氨酸激酶(C-terminal Src kinase,CSK)表达质粒研究其分子机制。 结果 实验发现,(C3,C6)任一位点的棕榈酰化缺失能引起 Fyn 的高活性表达,且 C6 位点影响更显著。 已知 CSK 激活后发生膜转移,FRET 检测证实其对细胞中的 Fyn 活性有下调作用,但不能有效调控(C3,C6)棕榈酰化位点缺失的 Fyn(GSS)活性。 结论 本文结果初步支持了 Fyn 活性受细胞内的物理空间定位分布的一种调控机制假设,即棕榈酰化缺失的 Fyn(GSS)受细胞膜上 CSK 抑制性的调节作用被减弱,从而促进了组成性的高活性表达。

    Abstract:

    Objective To investigate the molecular mechanism of palmitoylation modification in regulating the activity of non-receptor tyrosine kinase Fyn. Methods The intracellular Fyn activity was detected by applying fluorescence resonance energy transfer (FRET) technology, and the mechanism was investigated by combining with Fyn palmitoylation deficiency and C-terminal Src kinase ( CSK ) plasmid co-expression. ResultsExperimental data showed that single loss of either of ( C3, C6) palmitoylation sites resulted in higher Fyn activity, and C6 seemed more significant. It is known that CSK membrane translocation occurred after activation. FRET assay confirmed that CSK could down-regulate the activity of Fyn in cells, but could not effectively regulate the activity of Fyn(GSS) with the loss of palmitoylation sites. Conclusions The results in this study support the hypothesis on Fyn regulation by spatial localization, namely, non-palmitoylated Fyn (GSS) is less effective in the inhibitory regulation by CSK on cell membrane, thus promoting constitutive high activity expression

    参考文献
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引用本文

张 鑫,郭 佳,姚 辉,邓林红,欧阳明星.基于 FRET 成像探究棕榈酰化修饰调节 Fyn 激酶活性[J].医用生物力学,2023,38(2):228-235

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  • 收稿日期:2022-10-23
  • 最后修改日期:2022-11-27
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  • 在线发布日期: 2023-04-25
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